【オートファジーを活性化！】【17卒】 日本ケミファ 研究職の内定ES(エントリーシート) No.8256（東京理科大学/男性）（2016/9/9公開）

【背景・目的】適度な摂取カロリーの制限（ＣＲ）による抗 老化・寿命延伸の詳細な分子機構は不明ですが、オートファジーが注目を浴びています。化合物Ｘについて寿命延伸やオートファジー促進作用、メタボリックシンドローム予防などのＣＲ様効果も期待されていますが、その分子機構は不明です。化合物Ｘが代謝改善作用を示すＣＲ模倣薬となるかを明らかにするため、オートファジーに及ぼす影響とその機構を解析し ました。【方法】マウス肝臓細胞Ｈｅｐａ１－６とマウス胎児線維芽細胞ＭＥＦｓに化合物Ｘを処置しました。オートファジー機能への影響は、ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ法によりオートファゴソームマーカーＬＣ３と選択的基質ｐ６２タンパク質で評価しました。ｍＲＮＡへ及ぼす影響はＲｅａｌ－ＴｉｍｅＲＴ―ＰＣＲ法で解析しました。活性酸素種（ＲＯＳ）は蛍光プローブを用い、蛍光強度を定量しました。【結果・考察】「オートファジー機能解析」Ｈｅｐａ１－６で、化合物ＸはＬＣ３－ＩＩタンパク質量、ｐ６２のｍＲＮＡ・タンパク質量を上昇させました。Ａｔｇ５欠損ＭＥＦｓでもｐ６２タンパク質量を上昇させました。以上より、化合物Ｘはオートファジー誘導作用とｐ６２発現誘導作用をもつことが示唆されました。「Ｋｅａｐ１－Ｎｒｆ２経路の解析」ｐ６２で活性化するＫｅａｐ１－Ｎｒｆ２経路に着目しました。化合物Ｘは転写因子Ｎｒｆ２の核内発現量を上昇させましたが、ｐ６２欠損ＭＥＦｓでは変化しませんでした。以上より、化合物Ｘはｐ６２を介してＮｒｆ２の核内移行を促進することが示唆されました。「Ｋｅａｐ１－Ｎｒｆ２経路の開始点解析」ｐ６２の発現上昇のスイッチを特定するためによりｐ６２の上流因子ＴＦＥＢに注目しました。継時的に核画分のＴＦＥＢとＮｒｆ２のタンパク質を解析しました。Ｎｒｆ２よりも早期にＴＦＥＢタンパク質量が上昇し、ｐ６２のｍＲＮＡ発現量も上昇しました。以上より、前述までの機構はＴＦＥＢが開始点であることが示唆されました。「抗酸化機能解析」Ｎｒｆ２の下流因子のｍＲＮＡ発現を解析しました。Ｈｅｐａ１－６で、化合物Ｘは抗酸化下流因子Ｈｏ－１、Ｎｑｏ－１のｍＲＮＡ発現を上昇させました。そこでＲＯＳを定量しました。化合物Ｘの前処置でパラコートによるＲＯＳ誘導は抑制され、抗酸化効果を示しました。以上より、化合物Ｘの抗酸化機構とその効果を明らかにしました。 続きを読む

臨床現場での実務実習において、患者様の生活の負担を減らせるように取り組みました。患者様のQOLの低下を招いていることがとても気に掛かったからです。苦しむ声を耳にし、「私がなんとかしなければ」という気持ちが強まりました。そこで、薬学的な知識から原因を考え、代替案とその正当性を吟味し、医師に対して処方提案しました。患者様のQOL向上や生活でできることが増え、治療に対しても前向きになれたという声を聞き、治療生活の負担を減らすことは理論的な効果以上の結果をもたらす治療だということを学べた有意義な実習でした。 続きを読む

3年間取り組んでいる研究において、仮説を立ててディスカッションをすることに最も打 ち込みました。まずは様々な論文情報を基に自身で全力の考察をし、その上で先生方や研 究室内に意見を求め、着実に実験をしていくことを心掛けています。私は実験をするに当 たり、「実験の目的を明確化すること」を軸としています。こうすることで、論文調査、 仮説、ディスカッション、実験という4つの周期をスムーズに進めることができると考え ています。一人では解決に繋がらず、実験成果が実らない経験から、自身の仮説に多くの 人の意見を取り入れることで多面的な切り口の発見に繋がるディスカッションが重要であ ると気づきました。そこから先生方や研究室内で活発にディスカッションをすることで、 目的を明確化した研究周期を回転できるという収穫を得ました。現在、有意義なディス カッションを日々繰り返すことで自身のその能力を磨いています。 続きを読む